Dermatologische Zytologie

Färbung der Präparate

Sobald das Material am Objektträger vollständig getrocknet ist, kann das Präparat gefärbt werden. Handelsübliche Schellfärbungen vom Romanovsky­typ (z.B. Diff-Quik®) sind für die Praxis sehr gut geeignet. Prinzipiell sollten die Färbezeiten des Herstellers beachtet werden, in manchen Fällen ist es jedoch notwendig, die Eintauchzeiten zu verlängern: So brauchen zytologische Präparate, die häufig dicker sind als Blutausstriche, länger, bis die ausreichend Farbe aufgenommen wird. Wenn die Farbe schon mehrere Wochen verwendet wird, zeigt v. a. die blaue Lösung als erste schlechtere Färbeergebnisse, die an blassen Präparaten zu erkennen sind. Hier kann vorübergehend durch häufigeres oder längeres Eintauchen der Präparate Abhilfe geschaffen und noch ein annehmbares Färbeergebnis erzielt werden. Spätestens, wenn auch nach verlängerten Färbezeiten die Zellen im Mikroskop noch immer blass erscheinen oder bei einer Kontamination mit Bakterien, müssen die Farblösungen jedoch ausgetauscht werden. In dicht abschließbaren Gefäßen (z.B. Harnbecher, dicht schließende Gefrierboxen oder Marmeladegläser) sind die Reagenzien über längere Zeit haltbar als in klassischen Färbewannen. Nach dem Abspülen der Farbreste mit Leitungswasser werden die Präparate erneut luftgetrocknet. In eiligen Fällen kann das auch in einem Brutschrank geschehen oder der Vorgang durch das Platzieren auf einer warmen Oberfläche (z.B. laufende Laborgeräte) oder einen Haarföhn beschleunigt werden.

Klebestreifen-Präparate müssen nicht getrocknet werden und auch auf die Fixierung kann verzichtet werden, da die Probe durch den Kleber ohnehin fixiert ist und außerdem die alkoholische Fixierlösung viele Klebestreifen trübt. Zum Färben wird der Klebestreifen an ein Ende eines Objektträgers geklebt und mit diesem als Haltegriff in die Farblösungen getaucht (Abb. 3). Nach dem Trocknen wird der Klebestreifen erst abgelöst und dann mit der beprobten Seite nach unten über einen Tropfen Öl auf den Objektträger geklebt.

Mikroskopische Beurteilung

Die zytologische Beurteilung der Hautoberfläche wird besonders im Hinblick auf die Art einer vorliegenden Entzündung oder vorhandene Sekundärinfektionen durchgeführt, in manchen Fällen können durch die oberflächliche Zytologie aber auch Neoplasien dargestellt werden.

Handelt es sich beim Großteil der Zellen um neutrophile Granulozyten, liegt eine neutrophile oder eitrige Entzündung vor. Klassisch zeigen diese Entzündungen einen infektiösen Prozess an (v. a. bakteriell, Abb. 4), sie können aber auch steril sein (z.B. immunmediierte Erkrankungen wie Pemphigus foliaceus, Abb. 5, oder Begleitentzündung von Neoplasien). Im Fall von bakteriellen Infektionen zeigen die Neutrophilen häufig degenerative Veränderungen. Die Kerne sind aufgequollen und nur blass gefärbt, in Extremfällen sind die Zellen kaum noch als Neutrophile zu erkennen. Meistens sind zugleich intrazelluläre Bakterien nachweisbar, die im Gegensatz zu extrazellulär gelegenen beweisend für das Vorliegen eines septischen Geschehens sind. Auch Pilze und Protozoen können eitrige Entzündungen verursachen.
Liegen neben Neutrophilen auch bis zu 50% Makro­phagen vor, besteht eine pyogranulomatöse Entzündung, bei mehr als 50% Makrophagen wird die Entzündung als granulomatös bezeichnet. Für die Entstehung dieser beiden Typen von Entzündung sind die gleichen Ursachen verantwortlich, meistens handelt es sich um chronische Prozesse. Typisch sind Reaktionen auf Fremdkörper, Mykosen, Infektionen mit Protozoen (z.B. Leishmanien, Abb. 1) und einige Bakterien (z.B. Mykobakterien, Aktinomyzeten).

Die eosinophile Entzündung ist durch einen Anteil von mehr als 10% eosinophilen Granulozyten neben anderen Entzündungszellen gekennzeichnet. Sind bei eosinophilen Entzündungen intrazelluläre Bakterien nachweisbar, so stellen diese meistens eine Sekundärinfektion dar. Primärursachen dieser Entzündungen sind Erkrankungen des Eosinophilen-Granulom-Komplexes (Abb. 6), Neoplasien (v. a. Mastzelltumore und Lymphome), Allergien und Parasiten. Häufig sind Mastzellen und manchmal auch basophile Granulozyten in unterschiedlicher Menge zwischen den Eosinophilen zu finden. Ist der Gehalt an Mastzellen sehr hoch, muss differentialdiagnostisch an einen Mastzelltumor gedacht werden.
Lymphozytäre, plasmazelluläre und lymphoplasmazelluläre Entzündungen (mehr als 50% Lymphozyten/Plasmazellen) treten meistens im Zuge von chronischen Prozessen auf, bei immunmediierten Geschehen, viralen Infektionen und auch bei Hypersensitivitätsreaktionen. Ist der Gehalt an Plasmazellen sehr hoch, muss differentialdiagnostisch ein Plasmazelltumor in Betracht gezogen werden. Sind vermehrt mittelgroße Lymphozyten, lymphoide Blasten oder eine monomorphe Population von Lymphozyten vorhanden, ist das Vorliegen eines Lymphoms abzuklären (Abb. 7).

Da viele Hautpatienten chronisch erkrankt sind, wird die Zytologie nicht nur diagnostisch, sondern häufig auch zum Monitoring eingesetzt und bei jeder Kontrolluntersuchung durchgeführt. Aus diesem Grund ist es wichtig, die erhobenen Befunde inklusive der Anzahl an gefundenen Bakterien, Malassezien und Entzündungszellen zu dokumentieren, um eine Verbesserung oder auch eine Verschlechterung der Entzündung und Sekundärinfektion eindeutig feststellen zu können. Besonders bei der Erstvorstellung sind die Mikroorganismen und Zellen so zahlreich vorhanden, dass es kaum möglich ist, die Strukturen zu zählen. Es genügen aber semi-quantitative Angaben z. B. in Form von 1+, 2+ und 3+. 1+ bedeutet, dass nur wenige Bakterien/Malassezien/Entzündungszellen vorhanden sind, die erst nach sorgfältigem Suchen und möglicherweise nur an wenigen Stellen gefunden werden können. Bei einem Befund von 2+ sind wenige Bakterien/Malassezien/Entzündungszellen vorhanden, die jedoch sofort zu sehen sind. Sind reichlich Bakterien/Malassezien/Entzündungszellen vorhanden, wird dies als 3+ dokumentiert.

Fazit

Die dermatologische Zytologie ist ist eine rasch und kostengünstig durchführbare Untersuchungstechnik, die essentielle Informationen in der Diagnostik liefert und außerdem für die Auswahl des therapeutischen Managements ausschlaggebend ist. Sie kann mit etwas Übung zuverlässig im Praxislabor durchgeführt werden, somit ist von der ersten Visite an eine optimale Versorgung des Hautpatienten möglich. Es empfiehlt sich die Anschaffung von Fachliteratur (siehe weiterführende Literatur) und, wenn noch keine zytologische Erfahrung vorhanden ist, der Besuch von Workshops, in denen die Grundlagen der zytologischen Diagnostik gefestigt und erfahrene Zytologen auch komplizierte fachlichen Fragen beantworten können (z.B. in der Laboklin Akademie zu finden unter https://laboklin.de/de/)

Dr. Maria Christian

Leistungen zum Thema

Zytologie
Pathohistologie
Bakteriologische und mykologische Untersuchung
Erregernachweise mittels PCR