{"id":1339174,"date":"2015-04-10T16:08:19","date_gmt":"2015-04-10T14:08:19","guid":{"rendered":"https:\/\/laboklin.de\/?p=1339174"},"modified":"2024-11-04T11:01:40","modified_gmt":"2024-11-04T10:01:40","slug":"einsatzmoeglichkeiten-der-durchflusszytometrie-mittels-facs","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/laboklin.de\/de\/einsatzmoeglichkeiten-der-durchflusszytometrie-mittels-facs\/","title":{"rendered":"Einsatzm\u00f6glichkeiten der Durchflusszytometrie mittels FACS"},"content":{"rendered":"

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Die Abk\u00fcrzung FACS steht f\u00fcr\u00a0f<\/b>luorescencea<\/b>ctivated\u00a0c<\/b>ell\u00a0s<\/b>orting. Es handelt sich dabei um eine besondere Form der Durchflusszytometrie, bei der die mit Fluoreszenz-markierten Zellen gemessen und analysiert werden k\u00f6nnen. Die Zellen flie\u00dfen in einem Fl\u00fcssigkeitsstrom durch einen Laserstrahl und dabei werden Zellgr\u00f6\u00dfe, Innenstruktur und relative Intensit\u00e4t der Fluoreszenz bestimmt. Es stehen f\u00fcr zahlreiche Zelltypen, insbesondere Lymphozyten, Fluoreszenzmarkierte Antik\u00f6rper zur Verf\u00fcgung, die sich gegen die immunph\u00e4notypischen Oberfl\u00e4chenmerkmale (Cluster of Differentiation, abgek\u00fcrzt \u2018CD\u2019) der Zellen richten. Mittels dieser CD-Marker k\u00f6nnen nun die Zellen untersucht und n\u00e4her identifiziert werden. Zytotoxische T-Zell Lymphozyten stellen sich zum Beispiel als CD3 und CD8 positiv dar, aber CD21 und CD4 negativ.<\/p>\n

Diese Untersuchung wird in der Routinediagnostik insbesondere in der H\u00e4matologie eingesetzt. Da das Untersuchungsmaterial in fl\u00fcssiger Form vorliegen muss, eigenen sich Blutproben besonders gut. Zur Gew\u00e4hrleistung eines aussagekr\u00e4ftigen Ergebnisses ist es wichtig, dass die Zellen intakt sind, daher sollte die Untersuchung schnellstm\u00f6glich, binnen maximal 3 Tagen durchgef\u00fchrt werden. Bei LABOKLIN wird das FACS Ger\u00e4t f\u00fcr verschiedene wichtige Untersuchungen eingesetzt.<\/p>\n

1. Thrombozyten-Antik\u00f6rper<\/h2>\n

Vermehrtes Immunglobulin (vorwiegend IgG) auf der Oberfl\u00e4che von Thrombozyten f\u00fchrt zur vorzeitigen Phagozytose der Thrombozyten durch Makrophagen mit der Folge von Thrombozytopenie. Diese immun-mediierte Thrombozytopenie (IMT) kann prim\u00e4r oder sekund\u00e4r sein. Die seltene prim\u00e4re Form wird hervorgerufen durch Autoantik\u00f6rper, die gegen die thrombozytenspezifischen Epitope gerichtet sind. Die sekund\u00e4re immun-mediierte Thrombozytopenie hingegen steht im Zusammenhang mit verschiedenen Medikamenten, infekti\u00f6sen Erregern (Bakterien, Viren, Protozoen oder Heminthen), Neoplasie und anderen immun-mediierten Erkrankungen.<\/p>\n

Die prim\u00e4re IMT wird vorwiegend bei Hunden beobachtet, doppelt so h\u00e4ufig bei weiblichen wie bei m\u00e4nnlichen Hunden, in allen Altersklassen, aber am h\u00e4ufigsten bei mittelalten Tieren. Pr\u00e4disponierte Rassen sind dabei der Cocker Spaniel, Miniatur und Toy Pudel, Altenglischer Sch\u00e4ferhund (Bobtail), Golden Retriever sowie der deutsche Sch\u00e4ferhund.
\nDie gemessene Thrombozytenzahl ist in der Regel bei der prim\u00e4ren IMT mit weniger als 30 G\/l deutlich niedriger als bei der sekund\u00e4ren Form.<\/p>\n

Die Diagnostik kann mittels FACS \u00fcber einen Antithrombozyten-Antik\u00f6rper-Nachweis durchgef\u00fchrt werden. Dabei erfolgt eine Doppelinkubation zum Nachweis von an Thrombozyten gebundenem IgG. Antik\u00f6rperspiegel von <15% gelten als negativ, w\u00e4hrend >30% als positiver Nachweis f\u00fcr IMT gewertet wird. Das Probenmaterial (EDTA Vollblut) darf dabei nicht \u00e4lter als 3 Tage sein, um eine auswertbare Immunf\u00e4rbung zu erzielen. Die Untersuchung muss vor Beginn der immunsuppressiven Therapie eingeleitet werden, da es sonst zu falsch-negativen Ergebnissen kommt. Weitere diagnostische M\u00f6glichkeiten sind die diagnostische Therapie mit Kortison sowie der Nachweis von megakaryozyt\u00e4rer Hyperplasie im Knochenmark.<\/p>\n

2. Zellul\u00e4rer Immunstatus<\/h2>\n

Der zellul\u00e4re Immunstatus beinhaltet ein gro\u00dfes Blutbild sowie die Bestimmung der relativen und absoluten Anzahl der peripheren Lymphozyten: B-Zellen, T-Zellen gesamt sowie CD4+-(T-Helferzellen) und CD8+-Zellen (zytotoxische T-Zellen).<\/p>\n

Die Immunph\u00e4notypisierung des Blutes beruht auf der selektiven Erkennung von Zelloberfl\u00e4chenantigenen durch Fluorezenzfarbstoff-markierte monoklonale Antik\u00f6rper mittels Durchflusszytometrie (FACS). Die Untersuchung des zellul\u00e4ren Immunstatus ist indiziert, wenn die klinische Symptomatik eine prim\u00e4re oder sekund\u00e4re St\u00f6rung im zellul\u00e4ren Immunsystem vermuten l\u00e4sst.<\/p>\n

Bei Hunden kann die Erstellung eines Immunstatus hilfreich f\u00fcr die Diagnose einer Pyodermie, Demodikose, eines systemischen Lupus erythematodes und einer Leishmaniose sowie angeborener T-Zelldefekte sein. Verlaufsuntersuchungen k\u00f6nnen bei medikamenteller Therapie zur Kontrolle und Dosisanpassung genutzt werden.
\nBei Pferden dient er der Abkl\u00e4rung geh\u00e4ufter und prolongierter Infekte.<\/p>\n

Eine besondere Rolle spielt die Bestimmung des Immunstatus bei der Infektion mit dem Felinen Immunschw\u00e4che Virus (FIV).<\/p>\n

Das Virus verursacht chronisch-persistierende Infektionen mit einem progressiven Krankheitsverlauf. Durch die Infektion von immunkompetenten Zellen kommt es nach und nach zu einer Ersch\u00f6pfung des Immunsystems.<\/p>\n

Das Virus zeigt einen deutlichen Tropismus f\u00fcr T-Lymphozyten und Makrophagen. Hauptbetroffen von der Sch\u00e4digung sind dabei die T-Lymphozytenfunktionen, wobei quantitative und auch qualitative Defekte der T-Helferzellpopulation vorherrschen. Zun\u00e4chst f\u00fchrt ein Anstieg der CD8+-Zellen zu einem prozentualen Abfall der Anzahl CD4+-Zellen. Die Anzahl CD8+-Zellen bleibt \u00fcber die asymptomatische Zeit der Infektion erh\u00f6ht und sinkt erst relativ kurz vor Entwicklung klinischer Symptome ab. Zu Beginn der Infektion werden haupts\u00e4chlich CD4+-Zellen infiziert, hier finden sich dann auch die gr\u00f6\u00dften Virusmengen. Bei fortschreitender Infektion f\u00fchrt ein absoluter Abfall der CD4+-Zellen zu einer Verkleinerung des CD4+\/CD8+-Quotienten.<\/p>\n

Die humorale Immunabwehr zeigt erst relativ sp\u00e4t Sch\u00e4den in ihrer Funktion. Ein Abfall der B-Zellanzahl findet meist erst im finalen Stadium statt. Die Virusmenge im Blut steigt wieder deutlich an, eine Antik\u00f6rperantwort findet aber nicht mehr statt.<\/p>\n

Die Erstellung eines Immunstatus kann demzufolge eine Einsch\u00e4tzung der Prognose bei Vorliegen einer prim\u00e4ren oder sekund\u00e4ren Immunschw\u00e4che geben.<\/p>\n

3. Leuk\u00e4miedifferenzierung<\/h2>\n

Bei einer Lymphozytose von > 30 G\/l bzw. bei einer mittels Klonalit\u00e4tsuntersuchung (PARR) best\u00e4tigten lymphoproliferativen Erkrankung (Leuk\u00e4mie, Lymphom Stadium V) mit einer Mindestleukozytenzahl > 5 G\/l kann eine Leuk\u00e4mie-Differenzierung mittels FACS durchgef\u00fchrt werden. Mittels Verwendung der CD-Marker zur Identifizierung der Zellen kann mit dieser Untersuchung eine Einteilung in akute bzw. chronische Leuk\u00e4mie erfolgen (CD34: Stammzellmarker), welche einen wichtigen Hinweis zur Prognose sowie Therapiewahl liefern kann. Des Weiteren k\u00f6nnen die neoplastischen Zellen in B-Zell sowie T-Zell Lymphozyten sowie Untertypen unterteilt werden.<\/p>\n

Eine Differenzierung der myeloischen Leuk\u00e4mien mittels FACS ist mittlerweile auch bei Laboklin etabliert und kann insbesondere beim Auftreten von atypischen Blasten oder monozyt\u00e4ren Zellen angewendet werden. Die Diagnose der akuten myeloischen Leuk\u00e4mie erfolgt ebenfalls \u00fcber den CD34 Marker. \u00c4hnlich der lymphatischen Form muss auch f\u00fcr die akute myeloische Leuk\u00e4mie eine schlechte Prognose (<6 Monate) gestellt werden. Da die Klonalit\u00e4tsuntersuchung auf lymphoproliferative Erkrankungen beschr\u00e4nkt ist, ist die Leuk\u00e4miedifferenzierung mittels FACS die einzige wenig invasive Untersuchungsm\u00f6glichkeit f\u00fcr myeloische Leuk\u00e4mien am peripheren Blut.<\/p>\n

Allerdings ist bei den sogenannten leuk\u00e4moiden entz\u00fcndlichen Reaktionen, die aus einer hochgradigen Linksverschiebung, Neutrophilie und Monozytose bestehen, mit einer Gesamtleukozytenzahl von > 50 G\/l, zun\u00e4chst die klinische Untersuchung wichtig zum Nachweis einer pyogenen Infektion (z.B. Pyothorax, Pyometra, Peritonitis), immunmediierten Erkrankung (z.B. Glomerulonephritis, IMHA), Neoplasie, Gewebsnekrose oder eines Hyper\u00f6strogenismus.<\/p>\n

04 \/ 2015<\/p>\n

LABOKLIN Aktuell<\/div>\n

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Einsatzm\u00f6glichkeiten der Durchflusszytometrie mittels FACS<\/a><\/strong><\/p>\n

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